Общие реакции на гликозиды

Реакция с реактивом Фелинга

. В две мерные пробирки наливали по 2 мл водного извлечения, в одну из них добавляли 5 к. концентрированной хлористоводородной кислоты, а в другую равное количество воды очищенной. Нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 минут.

Подкисленный раствор нейтрализовали 10% раствором едкого калия до рН 7 по универсальному индикатору, а объем другой пробирки доводили водой очищенной до объема первой пробирки. К растворам в пробирках добавляли по 2 мл реактива Фелинга, кипятили в течение 1 минуты, оставляли в штативе на 10 минут и сравнивали объемы выпавшего кирпично-красного осадка закиси меди, свидетельствующего о наличии углеводов.

Наблюдения: объем выпавшего осадка в пробирке после проведения кислотного гидролиза намного больше осадка, выпавшего в пробирке без гидролиза.

Реакция с

β

-нафтолом.

К 2 мл водного извлечения прибавляли 3 к. 20% спиртового раствора β-нафтола и осторожно по стенкам пробирки прибавляли 2 мл концентрированной сульфатной кислоты.

Наблюдения: на границе раздела слоев жидкости появлялось вишнево-красное кольцо, свидетельствующее о наличии веществ гликозидного характера. При стоянии окраска перешла в фиолетовую.

Обнаружение полисахаридов

В мерный цилиндр вместимостью 25 мл помещали 10 мл 96% этанола и постепенно прибавляли 2 мл исследуемого извлечения.

Наблюдения: появление аморфного осадка свидетельствует о присутствии полисахаридов в изучаемом извлечении.

Обнаружение аминокислот

С 1% спиртовым раствором нингидрина.

При нагревании водного извлечения с 1% спиртовым раствором нингидрина образуется фиолетово-сиреневое окрашивание, что свидетельствует о наличии аминокислот в исследуемом сырье.

Хроматографическое изучение аминокислотного состава

Аминокислоты идентифицировали в водном экстракте в сравнении с 0,01% растворами референтных образцов 14 аминокислот. В качестве подвижной фазы была выбрана система растворителей бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) (4:1:2). По характерному фиолетовому окрашиванию пятен после обработки 0,2% раствором нингидрина в спирте с последующим нагреванием до 100°С были идентифицированы следующие аминокислоты: аланин, аспарагин, валин, серин, треонин, фенилаланин.

Схема хроматограммы представлена на рисунке 2.1.

Рис. 2.1 Схема хроматограммы аминокислот в водном извлечении травы фенхеля

Примечание:

1 - аланин, 2 - аргинин, 3 - аспарагин, 4 - валин, 5 - гистидин, 6 - изатин, 7 - орнитин, 8 - пролин, 9 - серин, 10 - треонин, 11 - вытяжка из травы фенхеля, 12 - фенилаланин.

Обнаружение дубильных веществ

Реакция с 1% раствором желатина.

К 2 мл водного извлечения изучаемого сырья прибавляли несколько капель 1% раствора желатина.

Наблюдения: появилась муть, исчезающая при добавлении избытка желатины.

Реакция с раствором железоаммониевых квасцов

. К 2 мл водного извлечения изучаемого сырья прибавляли 4к. раствора железоаммонийных квасцов.

Наблюдения: появлялось черно-зеленое окрашивание, что свидетельствует о наличии конденсированной группы дубильных веществ.

Обнаружение гидроксикоричных кислот

Гидроксикоричные кислоты в сырье изучали методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей 15% кислота уксусная. Пятна кислот имели голубую флуоресценцию в УФ-свете. После обработки парами аммиака голубая флуоресценция усилилась. Схема хроматограммы водного извлечения представлена на рисунке 2.2.

Рис 2.2 Схема хроматограммы обнаружения гидроксикоричных кислот в водном извлечении травы фенхеля

Как видно из рисунка 2.2. в результате хроматографического анализа водного извлечения травы фенхеля в сравнении со значениями Rf, приведенными в литературных источниках [10], были идентифицированы феруловая, хлорогеновая и неохлорогеновая кислоты.

Обнаружение органических кислот

Органические кислоты изучали методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей эилацетат-уксусная кислота-муравьиная кислота-вода (100:11:11:25) в сравнении с референтными образцами органических кислот (в виде 0,1% водного раствора). Высушенные пластины обрабатывали раствором смеси бромфенолового синего и метиленового красного (0,3 г бромфенолового синего, 0,1 г метиленового красного в 100 мл хлороформа).

Кислоты проявились в виде желтых пятен на синем фоне. Схема хроматограммы обнаружения органических кислот представлена на Рис. 2.3.