Электрофорез

Это метод разделения смеси веществ (белков, нуклеиновых кислот) на ее составляющие по массе в электрическом поле на носителе. В качестве носителя используют гель из агарозы. Концентрация агарозы в геле варьируется в зависимости от массы разделяемых фрагментов. В состав геля также входят вода и реакционный буфер. Расплав агарозы хранится в термостате при 60 градусах. Гель получается при заливке этого расплава на подложку, где он, при комнатной температуре, застывает В застывшем геле делаются лунки. Такой гель помещается в кювету между электродами. Сама кювета тоже заполнена буфером. Проба смешивается с краской и наносится в лунки геля. Затем в электрическом поле происходит разгонка пробы. Каждая фракция пробы с одинаковой массой формирует полосу. Эта полоса светится красным в ультрафиолете, за счет красителя. Определение массы этой фракции проводится относительно маркера. Маркер при разгонке в электрическом поле дает полосы с известной массой.

Параметры электрофореза: 120В, 70мА, 90 минут

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Рисунок 2

a4b полиморфизм гена eNOS, электрофорез в 2% агарозе.

, 2, 3, 4, 5, 6, 8 - норма 4b/4b (420 п.н.)

- гетерозигота 4а/4b (420, 393 п. н.)

- мутация 4а/4а (393 п. н.)