Проведение ПЦР для 4a4b полиморфизма гена эндотелиальной NO синтазы (eNOS)

a/4b полиморфизм обусловлен разным количеством 27-нуклеотидных повторов в четвертом интроне гена eNOS [22]. В норме их бывает четыре (4b-аллель), а при мутации - пять (4a-аллель).

Для ПЦР анализируемого участка гена eNOS были выбраны следующие праймеры:

- 5'-AGG CCC TAT GGT AGT GCC TTT-3'- 5'-TCT CTT AGT GCT GTG GTC AC-3' Самая подробная информация грязезащитные резиновые покрытия на сайте.

циклов амплификации проводились в конечном объеме 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1 мкг геномной ДНК, 250 пкмоль каждого праймера, 10мМ Tris-HCI pH 8.4, 1.2 mM, MgCI2, 50 mM KCI, 0,2 mМ каждого dNTP и одну единицу Taq-полимеразы (см. Таблицу 1). ПЦР включала: 45 сек - денатурация при 92 С°, 45 сек - отжиг при 56 С° и 45 сек - синтез при 72 С° (см. Таблицу 2).

Для генотипирования eNOS, продукты ПЦР анализировались в 2% агарозном геле. При комбинации аллелей формируются три генотипа: 4a4a (393 п.н.) ; 4a4b(393 п.н, 420 п.н.); 4b4b (420 п.н.).