Полимеразно - цепная реакция (ПЦР)

Этот метод используется для преумножения необходимого фрагмента ДНК. Создается реакционный раствор, содержащий реакционный буфер, дезоксинуклеозидтрифосфаты, праймеры прямой и обратный (For и Rev), ДНК полимеразу и пробу выделенной ДНК в качестве матрицы. Праймер - это олигонуклеотид (18-25 нуклеотидов), необходимый для запуска полимеразной реакции. Необходимо наличие двух праймеров: по одному на каждую цепь. Для PCR берется ДНК полимераза бактерий, живущих в гейзерах и термальных источниках. Она устойчива к высокой температуре. PCR имеет три стадии:

) Денатурация. При 92-96 градусах цепи ДНК расходятся

) Отжиг праймеров на цепи ДНК. При определенной температуре, специально подобранной для каждой пары праймеров, праймеры садятся на цепи ДНК по принципу комплиментарности.

3) Элонгация. ДНК полимераза начинает синтез ДНК от праймера в направлении от 5’ к 3’ концу. Через определенное время происходит переход к первой фазе. При повторной денатурации вновь синтезированные цепи ДНК отходят от “материнских”. Через определенное количество циклов (порядка 30-35) реакция прерывается.