Определение содержания кумаринов

,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, добавляли 50 мл 96% спирта этилового и кипятили в колбе с обратным холодильником 30 минут. Смесь фильтровали, колбу и фильтр промывали дважды 96% этанолом по 10 мл. Фильтраты объединяли, прибавляли 2 мл 10% раствора свинца ацетата и кипятили еще 3 минуты.

Горячую смесь фильтровали, колбу дважды промывали 96% этанолом по 10 мл. Спиртоводные вытяжки упаривали до водного остатка. Водные вытяжки обрабатывали 4 раза хлороформом порциями по 25 мл каждая. Объединенные хлороформные вытяжки промывали 5 мл воды, воду отделяли, хлороформные вытяжки сушили безводным натрия сульфатом.

Натрия сульфат отфильтровывали, промывали 3 раза по 10 мл хлороформом и раствор упаривали до сухого остатка, который растворяли в 12 мл 96% этанола.

К полученному раствору добавляли 20 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и нагревали 5 минут на водяной бане при температуре 50-60°С. К охлажденному раствору прибавляли 8 мл свежеприготовленной диазотированной кислоты сульфаниловой и измеряли оптическую плотность окрашенного раствора на спектрофотометре (UV/VIS 2800) в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 490 нм. Концентрацию кумаринов в полученном растворе находили по калибровочному графику.

Рис. 3.3. Калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации кумаринов в пересчете на умбелиферон

Количественное содержание кумаринов (Х, %) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле:

х V x K x 100 x100

Х = ----------------------------,x 10000 x (100 - W)

где С - концентрация, найденная по калибровочному графику, мг/мл;- объем вытяжки, мл;

К - коэффициент разведения;- масса навески, г;- потеря в массе при высушивании, %.

Результаты количественного определения кумаринов в объектах исследования представлены в таблице 6.

Таблица 6. Содержание кумаринов в сырье фенхеля обыкновенного (среднее из 5 измерений)